蓝柱胸叶甲虫检测

检测项目

1.形态特征检测：成虫体长测量（8.5-11.3mm0.02mm）、鞘翅纵沟间距（0.15-0.25mm）、前胸背板刻点密度（120-150个/cm）

2.分子生物学鉴定：COI基因序列分析（扩增片段658bp）、ITS2区域比对（置信度≥99%）、微卫星位点分型（SSR标记≥15个）

3.抗药性检测：乙酰胆碱酯酶活性（0.35-1.20μmol/min/mg）、羧酸酯酶比活力（ΔOD412=0.15-0.45）、细胞色素P450含量（0.8-2.5nmol/mg）

4.生理生化指标：血淋巴蛋白浓度（35-55mg/mL）、几丁质酶活性（U/mg=12-28）、保水率（72h失重≤15%）

5.环境适应性：温度耐受阈值（致死中温LT50=46.50.5℃）、湿度响应曲线（RH30%-90%梯度实验）、光照周期敏感性（L:D=16:8临界值）

检测范围

1.进口原木及木制品：松木/云杉/冷杉等针叶材表面及内部蛀道

2.农林产品：鲜切枝条/苗木/种子包装物夹带样本

3.仓储货物：木质托盘/集装箱垫木的隐蔽部位

4.生物标本：博物馆收藏标本的DNA降解度评估

5.土壤基质：越冬幼虫筛查（深度5-20cm土层取样）

检测方法

ISO23611-1:2018土壤无脊椎动物取样规范

GB/T35348-2017林木蛀干害虫检疫鉴定方法

ASTME2455-22昆虫抗药性生物测定标准指南

GB/T40154-2021昆虫标本分子生物学处理规程

ISO/IEC17025:2017检测实验室通用要求

检测设备

1.LeicaM205C体视显微镜：配备DFC450相机，实现8:1变比下的微距测量

2.ThermoNanoDropOneC微量分光光度计：1μL样本DNA纯度检测（A260/A280≥1.8）

3.Agilent4200TapeStation系统：DNA完整性评估（DIN值≥7.0）

4.Bio-RadCFX96实时荧光定量PCR仪：SYBRGreen法进行基因表达量分析

5.WatersACQUITYUPLCH-Class超高效液相色谱：有机磷代谢产物定量分析（检出限0.01ppm）

6.MettlerToledoXS205电子天平：0.01mg级虫体称重

7.MemmertIPP110培养箱：温度波动0.3℃的恒温抗性培育

8.OlympusBX53荧光显微镜：DAPI染色观察卵黄蛋白沉积

9.BeckmanCoulterCytoFLEX流式细胞仪：血细胞分型计数（精度2%）

10.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机：最大转速15,300rpm的蛋白提取